離子交換層析操作時(shí)的注意事項(xiàng) 

    離子交換層析的基本裝置及操作步驟與前面介紹的柱層析類似，這里就不再重復(fù)了。下面主要介紹離子交換層析操作中應(yīng)注意的一些具體問題。 (1)層析柱 

     離子交換層析要根據(jù)分離的樣品量選擇合適的層析柱，離子交換用的層析柱一般粗而短，不宜過長。直徑和柱長比一般為1:10到1:50之間，層析柱安裝要垂直。裝柱時(shí)要均勻平整，不能有氣泡。 (2)平衡緩沖液 

    離子交換層析的基本反應(yīng)過程就是離子交換填料平衡離子與待分離物質(zhì)、緩沖液中離子間的交換，所以在離子交換層析中平衡緩沖液和洗脫緩沖液的離子強(qiáng)度和pH 的選擇對(duì)于分離效果有很大的影響。平衡緩沖液是指裝柱后及上樣后用于平衡離子交換柱的緩沖液。平衡緩沖液的離子強(qiáng)度和pH 的選擇shou先要保證各個(gè)待分離物質(zhì)如蛋白質(zhì)的穩(wěn)定。其次是要使各個(gè)待分離物質(zhì)與離子交換填料有適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合，并盡量使待分離樣品和雜質(zhì)與離子交換填料的結(jié)合有較大的差別。一般是使待分離樣品與離子交換填料有較穩(wěn)定的結(jié)合。而盡量使雜質(zhì)不與離子交換填料結(jié)合或結(jié)合不穩(wěn)定。在一些情況下(如污水處理)可以使雜質(zhì)與離子交換填料有牢固的結(jié)合，而樣品與離子交換填料結(jié)合不穩(wěn)定，也可以達(dá)到分離的目的。     另外注意平衡緩沖液中不能有與離子交換填料結(jié)合力強(qiáng)的離子，否則會(huì)大大降低交換容量，影響分離效果。選擇合適的平衡緩沖液，直接就可以去除大量的雜質(zhì)。并使得后面的洗脫有很好的效果。如果平衡緩沖液選擇不合適，可能會(huì)對(duì)后面的洗脫帶來困難，無法得到好的分離效果。 (3)上樣 

     離子交換層析的上樣時(shí)應(yīng)注意樣品液的離子強(qiáng)度和pH 值，上樣量也不宜過大，一般為柱床體積的1－5％為宜，以使樣品能吸附在層析柱的上層，得到較好的分離效果。 (4)洗脫緩沖液 

    在離子交換層析中一般常用梯度洗脫，通常有改變離子強(qiáng)度和改變pH 兩種方式。改變離子強(qiáng)度通常是在洗脫過程中逐步增大離子強(qiáng)度，從而使與離子交換填料結(jié)合的各個(gè)組分被洗脫下來；而改變pH 的洗脫，對(duì)于陽離子交換填料一般是pH 從低到高洗脫，陰離子交換填料一般是pH 從高到低。由于pH可能對(duì)蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響，故一般通常采用改變離子強(qiáng)度的梯度洗脫。梯度洗脫的裝置前面已經(jīng)介紹了，可以有線性梯度、凹形梯度、凸形梯度以及分級(jí)梯度等洗脫方式。一般線性梯度洗脫分離效果較好，故通常采用線性梯度進(jìn)行洗脫。     洗脫液的選擇shou先也是要保證在整個(gè)洗脫液梯度范圍內(nèi)，所有待分離組分都是穩(wěn)定的。其次是要使結(jié)合在離子交換填料上的所有待分離組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都能夠被洗脫下來。另外可以使梯度范圍盡量小一些，以提高分辨率。 (5)洗脫速度 

    洗脫液的流速也會(huì)影響離子交換層析分離效果，洗脫速度通常要保持恒定。一般來說洗脫速度慢比快的分辨率要好，但洗脫速度過慢會(huì)造成分離時(shí)間長、樣品擴(kuò)散、譜峰變寬、分辨率降低等副作用，所以要根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的洗脫速度。如果洗脫峰相對(duì)集中某個(gè)區(qū)域造成重疊，則應(yīng)適當(dāng)縮小梯度范圍或降低洗脫速度來提高分辨率；如果分辨率較好，但洗脫峰過寬，則可適當(dāng)提高洗脫速度。 (6)樣品的濃縮、脫鹽 

    離子交換層析得到的樣品往往鹽濃度較高，而且體積較大，樣品濃度較低。所以一般離子交換層析得到的樣品要進(jìn)行濃縮、脫鹽處理。